Salah satu faktor risiko penularan Hepatitis B adalah tingkat pengetahuan tenaga kesehatan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui gambaran pengetahuan tenaga kesehatan tentang pencegahan risiko tertular Hepatitis B di Puskesmas Johar Baru berdasarkan jenis kelamin. Desain penelitian ini bersifat deskriptif. Dalam penelitian ini, pengambilan sampel dilakukan dengan metode kuota sampling, dengan cara membagikan lembar kuesioner. Objek penelitian adalah tenaga kesehatan di Puskesmas Johar Baru yang berjumlah 50 responden. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sebanyak 20 orang (40%) memiliki tingkat pengetahuan yang buruk. Diharapkan bagi institusi kesehatan untuk meningkatkan pembinaan dan himbauan dalam meningkatkan pengetahuan terhadap pencegahan risiko tertular Hepatitis B agar dapat menjaga keamanan dan keselamatan kerja untuk mencegah terjadinya risiko tertular Hepatitis B dan tidak membahayakan tenaga kesehatan atau pasien dikemudian hari.